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本文標題:"高效液相層析-液固層析和液層析實驗"

新聞來源:未知 發布時間:2016-10-2 13:51:09 本站主頁地址:http://www.027toilet.cn

高效液相層析-液固層析和液層析實驗


  混合性凝膠是由上述凝膠按不同比例混合而成,這類凝膠的顆粒及
孔徑比較均一、機械性能好、耐高壓、流速快且分辨率高。

  凝膠層析法設備簡單、操作方便,故早已被用于同工酶的分離,但
由于大多數同工酶的相對分子質量均很接近,故凝膠層析法主要用于分
離同工酶的高分子聚合物或同工酶與免疫球蛋白的復合物。

  (三)親和層析法  是利用配基和大分子之間專一性親和力而設計的
一類層析分離方法。將相應的配基(如底物、輔酶、抗體)與某種適宜的
不溶性大分子基質(常用瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠)共價地結合,將
樣品加到浸泡于緩沖液中的不溶性基質柱上,其中某些同工酶被選擇性
地留在柱上,其他型別被洗脫。然后用不同pH和不同離子強度的含有底
物的溶液將吸附于柱上的同工酶洗脫收集,并測其活性,此謂親和層析
法。此法過程簡單、迅速、特異性高、分離效率強,適于分離和提純同
工酶。

  (四)高效液相層析法  又稱高效液相色譜法、高壓或高速液相色譜
法,是在經典柱層析的基礎上發展而來的,具有高效、高速、高靈敏度
和自動化等優點。按固定相聚集狀態可分為液固層析和液液層析兩大類
;按分離機制不同可分為吸附、分配、離子交換凝膠和親和層析等類型
。在凝膠滲透色譜分析中,大分子的同工酶被排阻無法進入填料孔,最
先洗脫;小分子的同工酶可滲入填料孔,洗脫滯后。整個過程是在流動
相和填料孔內的固定相液體之間進行溶質分子分配的過程。在離子交換
色譜中的固定相是帶電的交換基團,該基團與酶蛋白分子的離子基團相
互交換,根據不同離子基團的交換特性之差異及相互作用不同,將同工
酶分離。

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