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本文標題："細菌質(zhì)粒的制備和分析實驗細菌質(zhì)粒"
新聞來源：未知 發(fā)布時間：2016-8-29 0:20:16 本站主頁地址：http://www.027toilet.cn
細菌質(zhì)粒的制備和分析實驗細菌質(zhì)粒
細菌質(zhì)粒的制備和分析實驗細菌質(zhì)粒的制備和分析
質(zhì)粒是存在于染色體外的能獨立復制的共價閉合環(huán)狀雙鏈DNA
分子，它廣泛存在于細菌等原核生物中，能夠給宿主細胞提供一些
表型，如抗藥性、分解復雜有機物的能力等。天然質(zhì)粒經(jīng)過改造后
可以作為基因工程的載體，這種質(zhì)粒載體在基因工程中具有極廣泛
的應用價值。因此質(zhì)粒的分離與提取是分子生物學最常用、最基本
的實驗技術(shù)之一。
細菌質(zhì)粒是最常用的基因工程載體，它的提取可以分為以下三
步：細菌的培養(yǎng)、菌體的收集和裂解、質(zhì)粒DNA的純化。細菌的培
養(yǎng)通常在選擇性的液體培養(yǎng)基中(如含某種適當濃度的抗生素)接種
一種含有質(zhì)粒的宿主菌，37℃、150～250r／min搖培過夜獲得。對
于某些松弛型復制的質(zhì)粒，可以在細菌生長的對數(shù)后期加入適量氯
霉素抑制宿主菌染色體DNA的復制和蛋白質(zhì)合成來增加質(zhì)粒拷貝數(shù)
。但目前所用的質(zhì)粒載體，如pUC系列，采用強的改進型pMBl復制
子，拷貝數(shù)能達到幾百個，因此不用進行后期的氯霉素處理即可獲
得高產(chǎn)量的質(zhì)粒。細菌的收集可以采用離心的方法，為了防止細菌
的代謝產(chǎn)物影響質(zhì)粒的純度可以用液體培養(yǎng)基或生理鹽水漂洗細菌
沉淀1～2次。細胞裂解的方法很多，如去污劑法、煮沸法、堿變性
法等。這些方法各有利弊，要根據(jù)質(zhì)粒的性質(zhì)、宿主菌的特性及后
續(xù)的純化方法等多種因素加以選擇。為了滿足一些實驗的要求，粗
提的質(zhì)粒還需要進一步純化，用氯化銫一溴化乙錠密度梯度超速離
心純化質(zhì)粒DNA是經(jīng)典的方法。
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