---
---
---(點擊查看產品報價)
本文標題："細菌基因表現的測量"
新聞來源：未知 發布時間：2011-11-14 0:49:12 本站主頁地址：http://www.027toilet.cn
細菌基因表現的測量
目的： 利用recombinant DNA技術去選殖一個基因﹐并測試是否可用載體上的啟動子
(promoter)去表現這個基因。同時，複習質體DNA的純化。
原理：詳見Recombinant DNA
有許多的載體（vector）像是pBlueScript，含有lacZ基因N端的部份，這部份往往有
multiple cloning sites，因此，有一段DNA片段插入后，就會造成lacZ基因N端無法產
生，其結果β-galactosidase的活性就會喪失。
我們就可以利用這一個特性，來幫助我們在做cloning時，作為篩選菌落內的細
菌所代的值體是否有我們要放入的DNA片段。這一方法叫做藍白挑（blue-white
selection），這的方法缺點有二
器材：
LB+Amp and starch azure plates
Pipetman
37 ℃ incubator
10 mM MgSO4
方法：
1. 星期三下午五至六點,向助教拿有前幾週基因轉植的細菌細胞，分別將其接種至3
ml的LB + Amp (50μg/ml)的液體培養液中,于37℃下隔夜培養。
2. 取1.5ml 隔夜培養的菌液,小量抽取質體并篩檢之。（參照之前的質體純化方法-鹼
性溶製法，但省略步驟8-9）。
3. 放到Speed Vac中乾燥10分鐘，用50 µl TE去溶質體DNA，取4 µl + 1 µl 的 6X
loading dye.（已加入RNase）。
4. 用電永分析質體DNA的大小，以確定是同一質體DNA。
5. 將其他隔夜培養的菌液，做10-2, 10-3和10-4稀釋。
6. 各取2ml的三種稀釋液，點在LB+Amp+X-gal, IPTG plates。
所有資料用于交流學習之用，如有版權問題請聯系，禁止復制,轉載注明地址
上海光學儀器一廠-專業顯微鏡制造商 提供最合理的顯微鏡價格
合作站點：http://www.sgaaa.com/顯微鏡百科
上一篇：了解溷濁度和活菌數目之間的關系
下一篇：臨床醫學組儀器設備_實體顯微鏡